不孕症的检查与诊断《十二》

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第12节　免疫学检查

免疫不育包括男性抗精子自身免疫不育－女性抗精子同种免疫不育的女性抗透明带免疫不育。

一、抗精子免疫不育的检查

抗精子免疫抗精子体液免疫（抗精子抗体）和抗精子细胞免疫。

（一）抗精子抗体的检测

1.性交后试验　于性交后6-24h内取宫颈粘液，在高倍镜下观察计数精子数。每高倍视野中，有>=21条检度活泼的精子者为最好，有6-20条很活泼的精子为良好，有1-5条活动精子属尚好，有少数不活动精子为较差，无精子者为阴性。
实验受测试夫妇心理和情绪情况及宫颈粘液中的理化特征等非免疫性因素的影响，可作为检测生殖道局部抗精子抗体的初筛手段。

2.精子-宫颈粘液接触或穿透试验（SCMC或s-c　MPT）SCMC是将精液与排卵前宫颈粘液混合孵育，镜下观察精子震颤现象，>50%为阳性，提示可能有局部抗精子抗体存在，s-c　MPT是将宫颈粘液装于毛细血管中，开口端加精液孵育后镜下观察5个以上活精子到达的最远距离，<20mm为穿透不良，>20mm为穿透良好。本试验可受非免疫因素影响，如精子的活力、宫颈粘液的理化性质等。

3.精子凝集试验　精子抗原与抗体结合后可发生凝集反应，凝集反应是抗原与特异性抗体反应的传统及敏感的方法，通过肉眼或显微镜观察结果。检测方法包括下列几种。

（1）明胶凝集试验（GAT）：适当稀释的精子悬液与10%明胶溶液混合后加入待测血清孵育，2h后若出现絮状物为阳性。此法简便，每次设阴性及阳性对照组，则结果较可靠。

（2）试管玻片凝集试验（TSAT）：按要求稀释的精子悬液与待测血清孵育2-4h后，镜下观察>=10%凝集为阳性。此法能观察凝集类型，方法简便，但可受多种因素干扰，如微生物、组织碎片，血中雄激素升高，均可发生非特异性凝集。每次试验需设对照组。

（3）浅盘凝集试验（TAT）：使用特制浅盘，只需检测样本几微升（ul），在倒置显微镜下观察>=10%凝集为阳性。此法所用样本较TSAT少，可同时检测较多的血清样本，较GAT敏感，亦少受非特异性因素干扰。若血清效价>=1：32，则可认为确含精子抗体。
其他尚有毛细管凝集法及平板凝集法，较少用。

4.补体依赖性细胞毒试验及精子制动试验　精子抗体与精子抗原结合，激活补体系统，导致细胞膜通透性及完整性的损害，若为制动抗体，使精子失去活力，制动值>=2为阳性；若为细胞毒抗体，则用某些染料染色阳性，要求精子活率>70%。微量法仅需样本几微升，对精子活动率较低的样本，可用上游法提取活精子，活率可达90%以上。本法仅能检测作用于精子尾干的抗体。特异性强，敏感性差，假阴性率较高。

5.被动血凝法　用精子提取物及精浆包被经处理的红细胞使之致敏，将致每红细胞与待测稀释血清在微量反应板上进行反应，出现红细胞凝集为阳性。此法不受精子活率、计数、精液中微生物或组织碎片的影响，研究者认为此法特异、敏感，但报道较少，其可靠性及实用性尚待证实。

6.酶联免疫吸附试验（ELISA）及生物素-亲合素酶联免疫吸附法（BA-ELISA）应用完整精子或精子膜抗原包被固相载体，待测样本中精子抗体与之培养后可结合于抗原表面。随之酶标第二抗体亦可结合其表面，后经加酶底物，根据底物显se情况判断结果。可用肉眼观察，亦可用酶标仪测定，后者客观准确，一般以大于一组阴性血清光密度均值加2倍标准为阳性。由于完整精子包被易致非特异性吸附，因此若以可溶性精子膜抗原包被，则本法敏感、特异、客观、定量，能确定抗体类型，且易操作。BA-ELISA是在常规ELISA基础上发展起来的新一代定量检测法，其敏感法性、特异性超过常规法。

7.免疫珠试验（ImmunbeadTest,IBT）用抗人免疫球蛋白抗体包被的聚丙烯酰胺微能结合于结合了精子抗体的精子表面，在相差显微镜或电子显微镜下可见到免疫珠随精子运行，若结合一个或多个免疫珠的精子比例>

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